Эти святые служили при дворе князя Ольгерда Литовского в XIV веке. Несмотря на распространение в этом княжестве христианства, они были язычниками и поклонялись огню. Но благодаря влиянию священника Нестора, духовника княжны Марии Ярославны, они пришли к познанию истины и тайно приняли святое крещение. После этого новообращенные отреклись от всего языческого, отказались стричь волосы и брить бороды, как было принято в Литве, и не ели мяса в постные дни.
Языческие жрецы сообщили об этом князю, который потребовал у своих слуг объяснения. Они назвали себя христианами – и оказались в темнице. Через год заточения Иоанн из трусости решил покориться князю: он постриг бороду и стал есть мясо во время Великого поста, но при этом втайне исповедовал христианскую веру. Сподвижники были отпущены вслед за ним.
Но его брат Антоний, не оставивший ревнования о Христе, продолжал соблюдать церковные посты и снова был брошен в темницу. Эти события вызвали раскаяние у Иоанна, который объявил о своей вере во Христа и был заключен в темницу вместе с братом. Там их посетил священник Нестор и преподал Святое Причастие. После года заключения братьев казнили через повешение. Это произошло 14 и 24 апреля 1347 года. Тела славных мучеников Антония и Иоанна были погребены в церкви святого Николая в Вильно.
Спустя некоторое время их родственник Евстафий также был обращен Нестором. Евстафий, пользовавшийся большим почетом у князя и получивший от него власть и уважение при дворе, решил открыто исповедовать Христа перед Ольгердом, отказавшись есть мясо во время Великого и Рождественского постов. Князь пришел в ярость и приказал немедленно его казнить. Евстафий был повешен на том же дубе, что и его товарищи, 13 декабря 1347 года. Через три дня он был погребен в храме рядом с телами святых братьев Антония и Иоанна.
Впоследствии дуб, на котором совершилась их казнь, срубили и на его месте воздвигли церковь в честь Святой Троицы. Престол в церкви сделали из ствола того дуба и поместили в ней мощи трех святых мучеников.
В 1374 году Константинопольский патриарх святой Филофей, при содействии своего ученика святого Киприана, будущего митрополита Киевского, перевез частицу их мощей из Вильно в Константинополь. Там от них совершилось множество чудес, поэтому патриарх официально утвердил почитание этих святых. В Русской Церкви оно получило распространение в XVI веке. Во время Первой мировой войны чудотворные мощи были перевезены в Москву. В 1946 году святыня вернулась в Вильнюс, в монастырь Святого Духа.
